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他mo昔芬(Tamoxifen)誘導系統
時間可控性強,避免胚胎期致死問題;
高靈敏度版本(如Cre-ERT2)對4-OHT的敏感性提升10倍。
原理:將Cre重組酶與突變型雌激素受體(ER-LBD)融合形成Cre-ER(Tam)融合蛋白。未給藥時,該蛋白與熱休克蛋白(HSP90)結合并滯留于細胞質;給藥后,他mo昔芬與ER結合,釋放Cre進入細胞核,介導loxP位點間的重組。
優勢:
四環素誘導系統(Tet-On/Tet-Off)
Tet-Off系統:無需四環素時,tTA蛋白激活Cre表達;給予多xi環素(Dox)則抑制Cre活性,適用于持續敲除場景。
Tet-On系統:需Dox激活rtTA蛋白才能啟動Cre表達,適用于短期誘導。
應用:常用于發育階段特異性基因功能研究,如肺上皮細胞基因敲除。
干擾素誘導系統(Mx1-Cre)
通過注射polyI:C或干擾素誘導Cre表達,適用于免疫細胞或肝臟等干擾素響應組織的研究。
構建Flox小鼠:在目標基因兩側插入loxP序列,確?;蛘9δ懿皇苡绊?。
選擇Cre工具鼠:根據實驗需求選擇組織特異性或藥物誘導型Cre品系(如Alb-CreERT2用于肝臟特異性敲除)。
藥物處理:
他mo昔芬:成年小鼠連續5天腹腔注射(75-100 mg/kg),溶解于玉米油或葵花籽油。
多xi環素:通過含藥飼料(600 mg/kg)連續喂養14天。
表型分析與驗證:通過PCR、Western blot或熒光報告系統確認敲除效率。
疾病模型構建:如腫瘤研究中誘導性敲除致癌基因,觀察腫瘤發生動態。
發育生物學:研究特定發育階段(如胚胎期或成年期)基因功能。
組織特異性研究:結合組織特異性啟動子(如神經元Nestin啟動子),解析基因在特定細胞類型中的作用。
藥物交叉污染:處理組與對照組需分籠飼養,避免他mo昔芬通過糞便交叉誘導。
脫靶效應:部分Cre品系存在本底活性(如Cre-ERT2的泄露表達),需設置嚴格對照。
劑量優化:藥物濃度和給藥頻率需根據動物年齡、品系調整,避免毒性。
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