電融合實驗

簡要描述：電融合實驗是一種利用微秒級高壓電脈沖使相鄰細胞膜瞬時穿孔并誘導其脂質重排，從而促使兩個或多個細胞在電場作用下合并成單個雜交細胞的技術，廣泛應用于單克隆抗體制備、體細胞核移植、干細胞重編程及腫瘤疫苗開發，兼具高效、可控、無化學殘留的優勢。

更新時間：2025-07-17
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一、技術定義與核心原理

電融合是一種利用電場誘導細胞膜結構改變，促使兩個或多個細胞融合形成雜交細胞的技術。其核心原理基于電穿孔效應的延伸：

細胞膜極化與排列：

交流電場（AC，頻率0.5–1.5 MHz）使細胞表面電荷極化，形成偶極子，驅動細胞沿電場線緊密排列成"珠鏈狀"（雙向電泳效應）。

膜穿孔與融合觸發：

短時高壓直流脈沖（DC，強度1–3 kV/cm，脈寬10–50 μs）擊穿相鄰細胞的接觸區細胞膜，形成臨時孔隙，脂質雙層在表面張力作用下重組融合。

細胞質混合與修復：

膜融合后胞質互通，細胞器重新分布，最終形成完整異核體（細胞核暫未融合）或多核融合細胞。

關鍵突破：1978年Zimmermannshou次實現植物原生質體電融合，奠定技術基礎。

二、標準化操作流程

1. 細胞預處理

細胞類型	處理方法	目標
植物原生質體	纖維素酶/離析酶消化細胞壁 → 蔗糖梯度純化	獲得無壁裸露細胞
動物細胞	低滲緩沖液（0.3M甘lu醇）洗滌 → 調整密度至10? cells/mL	去除血清干擾，增強電導率
卵母細胞/胚胎	透明帶酶解（如鏈霉蛋白mei）→ 去除卵丘細胞	暴露細胞膜便于接觸

2.電融合參數設置

儀器配置：ECM2001+、Multiporator等系統（集成AC/DC雙功能）。

核心參數：

步驟	參數范圍	作用
AC排列	頻率0.5–1.5 MHz，電壓50–150 V	細胞定向排列成鏈
DC脈沖融合	場強1–3 kV/cm，脈寬10–50 μs × 1–3次	擊穿接觸區細胞膜
緩沖液	低離子強度（0.3M甘lu醇 + 0.1–1mM Ca2?）	增強電導率，促進膜重組

3. 融合后處理

復蘇培養：37℃培養液靜置30分鐘，修復細胞膜。
雜交細胞篩選：

HAT培養基（雜交瘤技術）或熒光染料標記追蹤融合效率。

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2.電融合參數設置

3. 融合后處理

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