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簡要描述：穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞構(gòu)建實驗：用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法或慢病毒侵染的方法將構(gòu)建好的含靶基因的載體導(dǎo)入細(xì)胞，根據(jù)不同的基因載體中所含的抗性標(biāo)志選用相應(yīng)的藥物進行篩選混合陽性克隆。在陽性混合克隆的基礎(chǔ)上，得到單細(xì)胞長出的陽性單克隆，繼而得到穩(wěn)轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)染細(xì)胞株。
更新時間：2022-12-23瀏覽次數(shù)：2951詳細(xì)介紹
穩(wěn)轉(zhuǎn)株構(gòu)建實驗原理：
穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株是指經(jīng)合適的藥物濃度進行藥物篩選后，得到外源DNA穩(wěn)定整合到宿主染色體，并可以長時間表達(dá)外源目的基因的細(xì)胞。穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞株彌補了瞬時感染(或轉(zhuǎn)染)實驗中外源基因表達(dá)時間短的缺陷，便于長期觀察。穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞的篩選需根據(jù)不同基因載體中所含有的抗性標(biāo)志選用相應(yīng)的藥物，常用的抗性篩選有嘌呤霉素(puromycin)、 新霉素(neomycin)等。若實驗需求構(gòu)建穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株，我們建議通過慢病毒感染細(xì)胞進行藥物篩選的方法，此方法較質(zhì)粒轉(zhuǎn)染可以更加有效的將外源基因整合入基因組，且整合位點處于轉(zhuǎn)錄相對活躍的區(qū)域，從而獲得更加高效表達(dá)外源基因的穩(wěn)轉(zhuǎn)株細(xì)胞。
穩(wěn)轉(zhuǎn)株構(gòu)建實驗服務(wù)選擇：
1、穩(wěn)轉(zhuǎn)株整體服務(wù)(克隆構(gòu)建、病毒包裝穩(wěn)轉(zhuǎn)株構(gòu)建、檢測、單克隆細(xì)胞株篩選)；
2、穩(wěn)轉(zhuǎn)株構(gòu)建(穩(wěn)轉(zhuǎn)株構(gòu)建、檢測、單克隆細(xì)胞株篩選)。
穩(wěn)轉(zhuǎn)株構(gòu)建檢測服務(wù)說明
1、穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株以及陰性對照；
2、穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株鑒定結(jié)果；
3、客戶可免費使用已有的細(xì)胞株，若庫中沒有的需要客戶提供；
4、客戶需提供代轉(zhuǎn)染的質(zhì)粒，也可委托代構(gòu)建。
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