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材料：6孔板marker筆直尺20微升槍頭（滅菌）無血清培養基PBS準備：所有能滅菌的器械都要滅菌，直尺和marker筆在操作前紫外照射30min（超凈臺內）流程：1、先用marker筆在6孔板背后，用直尺比著，均勻地劃橫線，大約每隔0.5~1cm一道，橫穿過孔。每孔至少穿過5條線。2、在空中加入約5X105個細胞，具體數量因細胞不同而不同，掌握為過夜能鋪滿。3、第二天用槍頭比著直尺，盡量垂直于背后的橫線劃痕，槍頭要垂直，不要傾斜。4、用PBS洗細胞3次，去除劃下的細胞，加入...

初代培養或原代培養，是從供體獲取組織后的培養。組織和細胞剛剛離體，生物性狀尚未發生很大的變化，具有二倍體遺傳性狀，在供體來源充分、生物條件穩定的情況下（年齡、性別），在一定程度上能反映體內狀態。實驗方法原理消化培養法合成培養基胰蛋白酶消化培養法，能把組織塊分散成細胞團或單個細胞，便于細胞從培養液中攝取營養和排出代謝產物，細胞能較快地長成單層。本法尤適用于培養大量組織，細胞產量高；但用于經常性小量培養工作稍顯繁瑣，無菌操作不良時且易污染。實驗材料組織試劑、試劑盒Hanks培養液...

原理：腦實質內注射膠原酶，膠原酶破壞血管的基底層，導致滲漏血液流入周圍組織。動物：雄性SD大鼠，年齡10-12周，體重300-350g。麻醉期間，大鼠體溫維持在37度，體溫維持直到從麻醉狀態蘇醒，恢復正常運動為止。建模：大鼠麻醉，固定立體定位儀上，在頭皮上做1cm長的中線切口。用棉簽除去覆蓋在大鼠頭皮上的軟組織，確認顱骨上的Bregma點位置。右側鉆孔的位置：Bregma點前0.6mm，側面2.9mm，微量注射器進入基底節，深度距顱骨平面5.5mm。以0.1ul/min速度注...

藥品：6-OHDAHCl：16μg溶解在4μLACSF中。ACSF：0.15MNaCl,2.75mMKCl,1.2mMCaCl2,ａnd0.85mMMgCl2。動物：雄性Wistar大鼠，重量300-400g。建模：1.大鼠常規麻醉，然后固定在立體定位儀上。2.暴露大鼠顱骨，在右側內側前腦束（medialforebrainbundle,MFB）上方鉆孔，孔的坐標:(AP),-1.9mm,(ML),-1.9mm,(DV),-7.2mm。3.0.5μL/min，注射4ul，為避免...

肢體缺血動物模型是進行缺血損傷機制、血管新生等研究的基礎，成功制作一種效果確切、重復性強的肢體缺血模型是保證實驗研究能夠順利進行的關鍵。當前缺血性疾病患者日漸增多，以糖尿病肢體動脈閉塞癥（DAO）、閉塞性動脈硬化癥（ASO）和血栓閉塞性脈管炎（TAO）為主的下肢缺血性疾病發病率逐年增加。國外資料顯示，70歲以上老年人群中僅動脈硬化閉塞癥患病率即可達15%~20%。而患病人群范圍可覆蓋至青壯年，其高發生率和廣泛累及率已嚴重危害著人們的身心健康和生存質量，亟待探索其發生機制、預防...

藥品：6-OHDAHCl：16μg溶解在4μLACSF中。ACSF：0.15MNaCl,2.75mMKCl,1.2mMCaCl2,ａnd0.85mMMgCl2。動物：雄性Wistar大鼠，重量300-400g。建模：1.大鼠常規麻醉，然后固定在立體定位儀上。2.暴露大鼠顱骨，在右側內側前腦束（medialforebrainbundle,MFB）上方鉆孔，孔的坐標:(AP),-1.9mm,(ML),-1.9mm,(DV),-7.2mm。3.0.5μL/min，注射4ul，為避免...

1，什么是瞬時轉染和穩定轉染？瞬時轉染：外源片段的表達時間短暫。這主要是因為外源導入的裸露的載體整合入基因組的幾率非常低，所以以染色體外(episomal)形式存在，不能隨細胞分裂而一同復制導致最后拷貝數被稀釋導致的。而且考慮到細胞分裂會稀釋質粒的量，所以起初轉染的質粒拷貝數*。這就導致瞬時轉染呈現一個高拷貝到低拷貝迅速降低的過程，且無法在這個系統上實現可誘導表達。穩定轉染：是相對瞬時轉染而言，進入細胞的質粒整合入細胞基因組中，并能隨細胞分裂穩定傳遞下去。在這個系統中，質粒表...